DB3706∕T 100-2024 苹果砧木和品种双脱毒苗木组培繁育技术规范(烟台市)
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ID： |
051E8439F2B84F4D8492DD8E1E1F444B |
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文件大小(MB)： |
0.42 |
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页数： |
7 |
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文件格式： |
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日期： |
2024/9/5 |
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ICS 65.020.20,CCS B 61 □B3706,烟 台 市 地 方 标 准,DB 3706/T 100—2024,苹果砧木和品种双脱毒苗木组培繁育技术,规范,Technical specifications for tissue culture and breeding of apple rootstocks and,varieties with double virus-free seedlings,2024 -07-30 发布2024 -08-30 实施,烟台市市场监督管理局 发布,DB 3706/T 100—2024,目 次,前言.II, 范围 1,2规范性引用文件..1,3术语和定义 1,4外植体类型及取材.1,5无菌体系建立1,5.1接种工具灭菌.1,52 外植体消毒..1,5.3 转接外植体培养基配方 1,5.4 转接外植体培养基配制 1,55 タト植体转接 1,6初代培养.2,61 初代培养基配方2,62 初代培养基配制2,63 初代培养环境控制..2,7脱毒处理.2,71 热处理 2,72茎尖剥离.2,73茎尖培养.2,74病毒检测.2,8脱毒苗继代培养..2,8.1继代培养基配方 2,82继代培养条件3,83继代培养污染控制 3,9生根培养.3,9.1 生根培养基配方 3,92生根培养环境控制 3,9.3生根转接方式及材料要求3,10脱毒种苗温室驯化3,101 驯化时期..3,102瓶苗分级3,10.3驯化流程3,11移栽管理3,I,DB 3706/T 100—2024,q 亠 —,刖 a,本文件按照GB/T 11-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定,起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任,本文件由烟台市农业农村局提出、归ロ并组织实施,II,DB 3706/T 100—2024,苹果砧木和品种双脱毒苗木组培繁育技术规范,1范围,本文件规定了苹果砧木和品种双脱毒苗木繁育的外植体类型及取材、无菌体系建立、初代培养、脱,毒处理、脱毒苗继代培养、生根培养、脱毒种苗温室驯化和移栽管理,本文件适用于烟台地区苹果砧木和品种双脱毒种苗繁育工厂化作业,2规范性引用文件,本文件没有规范性引用文件,3术语和定义,本文件没有需要界定的术语和定义,4外植体类型及取材,选取当年生枝条的茎尖或茎段。4月.6月,选取大小1.5 cm~2.5 cm的茎尖;11月.次年2月,选,取3 cm左右、包含2个腋芽的茎段,5无菌体系建立,51接种工具灭菌,将手术刀、镜子和接种盘等接种工具放置高压蒸汽灭菌锅121 °C灭菌15 mine,5.2 外植体消毒,5.2.1 4月.6月在大田选取的外植体消毒流程包括:流水冲洗(2 h) 一75 %的酒精浸泡(20 s) 一,01 %氯化汞溶液浸泡(5 min~7 min) f抗坏血酸无菌液(50 mg/L)冲洗5遍,5.2.2 11月.2月选取的外植体需先在光照培养箱中预培养出新芽,再对新芽进行消毒,其流程包括:,01 %氯化汞溶液浸泡(5 min~7 min) f抗坏血酸无菌液(50 mg/L)冲洗5遍,5.3 转接外植体培养基配方,改良本本植物用培养基(WPM)+300 mg/L维生素C + 0.5 %活性炭+ 6 %琼脂粉+ 20 g/L蔗糖,5.4 转接外植体培养基配制,按照配方煮制培养基,5.5外植体转接,1,DB 3706/T 100—2024,消毒好的的外植体用镜子置于接种盘内,用手术刀将每端切割2 mm (有叶片的顶芽只保留最上端2,片叶),随后接到培养基上,6初代培养,6.1 初代培养基配方,改良WPM+0.5 mg/L 6-BA+6 %琼脂粉+20 g/L蔗糖,6.2 初代培养基配制,按照配方煮制培养基,6.3 初代培养环境控制,在光照强度1800 Lux.2400 Lux,温度21 ℃.23 c的无菌培养室内进行光照培养,光照时间12,h/d.14 h/do,7脱毒处理,7.1 热处理,将初代培养好的组培瓶苗放到温度25 c递増到38 C的光照培养箱内,保持38 C恒温、24 h光照,处理32 d.38 do,7.2 茎尖剥离,经过热处理后存活的瓶苗,高倍解剖镜下剥离0.2 mm.0.5 mm的植株生长点,7.3 茎尖培养,将经过热处理及茎尖剥离后的生长点定植于温度20 °C.23 °C、光照强度1800 Lux.2200 Lux的培,养基中,直到茎尖长到约3 cm左右的完整植株,74病毒检测,经过脱毒处理的茎尖繁殖出20株左右瓶苗时,随机抽取10株到第三方机构(拥有病毒检测资格)进,行病毒检测,确定是否含有苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid, ASSVD)、苹果花叶病毒(Apple,mosaic virus, ApMV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV)、苹果茎沟,病毒(Apple stem grooving virus, ASGV)和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus, ASPV),经病毒检测,脱除上述病毒苗可进行继代培养,8脱毒苗继代培养,8.1 继代培养基配方,WPM+0.3 mg/L 6-BA+6 %琼脂粉+20 g/L蔗糖,pH值为56,扩繁周期为32 d.38 do,2,DB 3706/T 100—2024,8.2 继代培养条件,光照时数12 h/d.14 h/d,光照强度2400 Lux.3200 Lux 〇,8.3 ……
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